请升级浏览器版本

你正在使用旧版本浏览器。请升级浏览器以获得更好的体验。

Chrome

Firefox

Opera

Edge

实验步骤

发布时间: 2023-10-27作者: 来源: 浏览次数:

2-7实验方法与步骤要求（学生交互性操作步骤应不少于10步）

1、药用植物检索

学生首先需要登陆系统，选择所需要学习的模块，如花程式虚拟实验、花图式虚拟实验或药用植物检索鉴定。在各个模块中各有多个操作步骤，可按需要进行操作。如：

（1）登陆。

（2）模块选择—花程式虚拟实验。从众多花图式中选择一种进行练习。

2、根据花图式，选择花程式的各个组成部分。

3、模块选择—花图式虚拟实验。从众多花程式中选择一种进行练习。

（4）根据花程式，选择正确的花图式。

（5）根据花程式花图式，检索到科。

（6）代表植物简介与检索反馈。

4、特殊药用植物检索与鉴定。

5、药效评价实验：吗啡的镇痛作用测试——热板实验法

步骤1：动物称重、编号

对每只小鼠进行称重，并作记录，选取18-22 g的小鼠用于实验。将小鼠进行随机编号，并做标记。（动态显示称重标号的过程）.

步骤2：YLS-6B智能恒温热板仪的开机、预热和参数设定

出现室温15°C，智能恒温热板仪画面（包括电源连接线）

操作：

（1）打开主机电源（显示开关位置，动画）

提示：电源开关打开后，至少要预热30秒钟。

（2）参数设置：按下设置按钮，通过调节键设置参数。

将热板的表面加热至55±1℃的恒定温度，通过内置数字温度计测量，精度为1℃。

选择实验动物，实验器材和药品

步骤3：测定每只动物的基础痛阈值，筛选并分组

（1）测定基础痛阈值：基础痛阈值是指将小鼠置于（55±1℃）的热板上,记录自其足底接触热板至出现舔后足的时间。

（2）筛选合格小鼠：测定正常痛阈值2次,取平均值为基础痛阈，筛选小鼠8只。

（3）分组：将小鼠随机分为2组：吗啡组和生理盐水对照组。

步骤4：皮下注射吗啡或生理盐水

1.吸取药物（动态显示吸药过程）

2.注射：生理盐水对照组：皮下注射生理盐水0.1 ml/10 g；实验组皮下注射0.3%吗啡0.1 ml/10 g。（动态显示注射过程）

提示：皮下注射时，针头与皮肤角度不宜太大，浅进针后水平移行约0.4cm后再缓慢推注药物。撤出针头不宜太快，用拇指按住皮肤缓慢拔出，并保持拇指停留一段时间，以免药液漏出。

步骤5：数据统计

步骤6：测定给药后痛反应时间

步骤7：数据处理

6、不良反应评价实验：条件性位置偏爱实验评价吗啡药物依赖性相关的行为学变化

一、实验前准备：

步骤1：

1. 实验仪器的调试：

穿梭箱：检查隔音柜照明和通风是否正常

信号传输系统：检查信号传输是否通畅、软件程序启动及运行情况是否正常

1.实验者带好口罩，带好帽子，穿鞋套，戴手套，进入实验区域

步骤2：动物称重、编号、标记、分组

操作：将小鼠16只，分别放入天平上进行称重，并同时用苦味酸做好标记

随机将动物分为生理盐水组或吗啡组，每组8只。

步骤3：预适应过程：行为实验前2天，每天由实验操作者将小鼠从饲养环境转移置于实验环境中适应30 min。主要完成A.由实验操作员抚摸两次，B.体验腹腔注射的捉持方式.用以减少实验过程中的应激，并适应并使之熟悉实验员及其抓取操作。

二、正式实验过程：

步骤4：第1天（即预适应两天后）进行实验前测试(pretest)，即将小鼠放入CPP箱中，取出隔板，使小鼠自由探索CPP箱15 min。软件分析并记录小鼠在CPP箱的两侧所处的时间，计算其基础偏爱值，并将在单侧停留时间超过10 min的小鼠剔除。每组取6只开展后续实验。

步骤5：

提示：在接下来的四天中，每天按照筛选后的分组顺序进行。此阶段的目的是让药物与箱体搭配，将实验动物注射药物后限制在一侧箱体，使动物在药物与箱体之间建立起联系。

1、第2~4天，进行条件性关联训练(conditioning)，需要插上CPP箱的隔板。

2、注意！！每组6只小鼠，其中任选3只选择黑白条粗糙地板侧为伴药箱，另3只选择黑白方块地板光滑侧为伴药箱。

3、小鼠腹腔注射（0.1ml/10g）盐酸吗啡后放入与吗啡奖赏刺激相关联的单侧CPP箱体中，并将其定义为吗啡侧（伴药箱）。小鼠自由探索该侧环境30 min后，放回原笼内；6 h后，腹腔注射生理盐水（0.1ml/10g）后放入对侧箱体，自由探索该侧环境30 min后，放回原笼内。

4、对照组小鼠进行同样的操作，两次腹腔注射的都是生理盐水（0.1ml/10g）。

步骤6：第5天进行测试(test)，取出CPP箱中的隔板。不注射药物，也不注射生理盐水，使小鼠自由探索CPP箱15 min。记录小鼠在两侧所处的时间，并用吗啡侧的时间减去生理盐水侧的时间，除以15分钟，作为每分钟吗啡CPP 评分。

提示：以上整个条件性位置实验过程都要注意保持实验室温度、湿度、噪音、气味的一致性，避免外界的干扰。

数据处理：数据处理：位置偏爱评分（CPP score）=（伴药侧时长-对侧时长）/15。

步骤7：数据统计及分析数据表达为均值±标准误（mean±SE），多组数据之间采用重复检测的单因素方差分析，同组的pretest和test数据采用双侧配对t检验，不同组之间的test或pretest数据采用双侧双样本等方差t检验。P<0.05表明两组数据之间的差异具有统计学意义。* P<0.05，** P<0.01

互动题

问题1：请选择可能影响CPP实验的因素：(ABCD)

7、训练因素B.实验环境因素C.动物个体因素D.药物的药理学因素

问题2：请选择与实验环境相关的可能对动物产生刺激的因素：(ABCD)

8、箱体颜色B.箱体材质C.箱体气味D.实验室光照E.实验员的声音

问题3：CPP实验一般分为哪几个阶段？(ABC)

9、前测 B.训练C.测试。

问题4：CPP实验，进行适应环境和前期测试，描述正确的是？( ABCD)

A.使动物熟悉实验装置 B.避免个体差异太大 C.得到基础偏爱值 D.行为学实验普遍需要此环节

问题5：单选题：训练阶段一般为 1-5次，每次 10-30分钟。本实验选择的条件是：（A）

A.3次，每次30min B. 5次，每次15min C. 3次，每次10min D. 5次，每次10min

问题6：关于给药途径可能对实验结果的影响，请选择描述合理的选项：（ABCD）

A.当静脉注射给药时，形成模型比较容易，反应比较强，所需时间较短；

B.而腹腔注射或皮下注射则需要相对长一些的时间，且反应相比较弱。

C.这主要是药代动力学的影响。

D.许多实验均说明给药途径是形成反应的关键因素之一。

问题7：单选题：以下是基础值的测定结果，剔除部分数据的依据是：在15min的前测中动物在任何一侧箱体停留时间超过__则被淘汰。 ( B)

A. 8min B.10min C. 12min

思考题：

10、如何利用条件性位置偏爱实验方法评价未知化合物的成瘾作用？

11、其它评价化合物成瘾作用的实验方法还有哪些？

2-7实验方法与步骤要求（学生交互性操作步骤应不少于10步）

1、药用植物检索

学生首先需要登陆系统，选择所需要学习的模块，如花程式虚拟实验、花图式虚拟实验或药用植物检索鉴定。在各个模块中各有多个操作步骤，可按需要进行操作。如：

（1）登陆。

（2）模块选择—花程式虚拟实验。从众多花图式中选择一种进行练习。

2、根据花图式，选择花程式的各个组成部分。

3、模块选择—花图式虚拟实验。从众多花程式中选择一种进行练习。

（4）根据花程式，选择正确的花图式。

（5）根据花程式花图式，检索到科。

（6）代表植物简介与检索反馈。

4、特殊药用植物检索与鉴定。

5、药效评价实验：吗啡的镇痛作用测试——热板实验法

步骤1：动物称重、编号

对每只小鼠进行称重，并作记录，选取18-22 g的小鼠用于实验。将小鼠进行随机编号，并做标记。（动态显示称重标号的过程）.

步骤2：YLS-6B智能恒温热板仪的开机、预热和参数设定

出现室温15°C，智能恒温热板仪画面（包括电源连接线）

操作：

（1）打开主机电源（显示开关位置，动画）

提示：电源开关打开后，至少要预热30秒钟。

（2）参数设置：按下设置按钮，通过调节键设置参数。

将热板的表面加热至55±1℃的恒定温度，通过内置数字温度计测量，精度为1℃。

选择实验动物，实验器材和药品

步骤3：测定每只动物的基础痛阈值，筛选并分组

（1）测定基础痛阈值：基础痛阈值是指将小鼠置于（55±1℃）的热板上,记录自其足底接触热板至出现舔后足的时间。

（2）筛选合格小鼠：测定正常痛阈值2次,取平均值为基础痛阈，筛选小鼠8只。

（3）分组：将小鼠随机分为2组：吗啡组和生理盐水对照组。

步骤4：皮下注射吗啡或生理盐水

1.吸取药物（动态显示吸药过程）

2.注射：生理盐水对照组：皮下注射生理盐水0.1 ml/10 g；实验组皮下注射0.3%吗啡0.1 ml/10 g。（动态显示注射过程）

提示：皮下注射时，针头与皮肤角度不宜太大，浅进针后水平移行约0.4cm后再缓慢推注药物。撤出针头不宜太快，用拇指按住皮肤缓慢拔出，并保持拇指停留一段时间，以免药液漏出。

步骤5：数据统计

步骤6：测定给药后痛反应时间

步骤7：数据处理

6、不良反应评价实验：条件性位置偏爱实验评价吗啡药物依赖性相关的行为学变化

一、实验前准备：

步骤1：

1. 实验仪器的调试：

穿梭箱：检查隔音柜照明和通风是否正常

信号传输系统：检查信号传输是否通畅、软件程序启动及运行情况是否正常

1.实验者带好口罩，带好帽子，穿鞋套，戴手套，进入实验区域

步骤2：动物称重、编号、标记、分组

操作：将小鼠16只，分别放入天平上进行称重，并同时用苦味酸做好标记

随机将动物分为生理盐水组或吗啡组，每组8只。

步骤3：预适应过程：行为实验前2天，每天由实验操作者将小鼠从饲养环境转移置于实验环境中适应30 min。主要完成A.由实验操作员抚摸两次，B.体验腹腔注射的捉持方式.用以减少实验过程中的应激，并适应并使之熟悉实验员及其抓取操作。

二、正式实验过程：

步骤4：第1天（即预适应两天后）进行实验前测试(pretest)，即将小鼠放入CPP箱中，取出隔板，使小鼠自由探索CPP箱15 min。软件分析并记录小鼠在CPP箱的两侧所处的时间，计算其基础偏爱值，并将在单侧停留时间超过10 min的小鼠剔除。每组取6只开展后续实验。

步骤5：

提示：在接下来的四天中，每天按照筛选后的分组顺序进行。此阶段的目的是让药物与箱体搭配，将实验动物注射药物后限制在一侧箱体，使动物在药物与箱体之间建立起联系。

1、第2~4天，进行条件性关联训练(conditioning)，需要插上CPP箱的隔板。

2、注意！！每组6只小鼠，其中任选3只选择黑白条粗糙地板侧为伴药箱，另3只选择黑白方块地板光滑侧为伴药箱。

3、小鼠腹腔注射（0.1ml/10g）盐酸吗啡后放入与吗啡奖赏刺激相关联的单侧CPP箱体中，并将其定义为吗啡侧（伴药箱）。小鼠自由探索该侧环境30 min后，放回原笼内；6 h后，腹腔注射生理盐水（0.1ml/10g）后放入对侧箱体，自由探索该侧环境30 min后，放回原笼内。

4、对照组小鼠进行同样的操作，两次腹腔注射的都是生理盐水（0.1ml/10g）。

步骤6：第5天进行测试(test)，取出CPP箱中的隔板。不注射药物，也不注射生理盐水，使小鼠自由探索CPP箱15 min。记录小鼠在两侧所处的时间，并用吗啡侧的时间减去生理盐水侧的时间，除以15分钟，作为每分钟吗啡CPP 评分。

提示：以上整个条件性位置实验过程都要注意保持实验室温度、湿度、噪音、气味的一致性，避免外界的干扰。

数据处理：数据处理：位置偏爱评分（CPP score）=（伴药侧时长-对侧时长）/15。

步骤7：数据统计及分析数据表达为均值±标准误（mean±SE），多组数据之间采用重复检测的单因素方差分析，同组的pretest和test数据采用双侧配对t检验，不同组之间的test或pretest数据采用双侧双样本等方差t检验。P<0.05表明两组数据之间的差异具有统计学意义。* P<0.05，** P<0.01

互动题

问题1：请选择可能影响CPP实验的因素：(ABCD)

7、训练因素B.实验环境因素C.动物个体因素D.药物的药理学因素

问题2：请选择与实验环境相关的可能对动物产生刺激的因素：(ABCD)

8、箱体颜色B.箱体材质C.箱体气味D.实验室光照E.实验员的声音

问题3：CPP实验一般分为哪几个阶段？(ABC)

9、前测 B.训练C.测试。

问题4：CPP实验，进行适应环境和前期测试，描述正确的是？( ABCD)

A.使动物熟悉实验装置 B.避免个体差异太大 C.得到基础偏爱值 D.行为学实验普遍需要此环节

问题5：单选题：训练阶段一般为 1-5次，每次 10-30分钟。本实验选择的条件是：（A）

A.3次，每次30min B. 5次，每次15min C. 3次，每次10min D. 5次，每次10min

问题6：关于给药途径可能对实验结果的影响，请选择描述合理的选项：（ABCD）

A.当静脉注射给药时，形成模型比较容易，反应比较强，所需时间较短；

B.而腹腔注射或皮下注射则需要相对长一些的时间，且反应相比较弱。

C.这主要是药代动力学的影响。

D.许多实验均说明给药途径是形成反应的关键因素之一。

问题7：单选题：以下是基础值的测定结果，剔除部分数据的依据是：在15min的前测中动物在任何一侧箱体停留时间超过__则被淘汰。 ( B)

A. 8min B.10min C. 12min

思考题：

10、如何利用条件性位置偏爱实验方法评价未知化合物的成瘾作用？

11、其它评价化合物成瘾作用的实验方法还有哪些？

电话: (021)65642805邮箱: fanglei@fudan.edu.cn 地址:上海市杨浦区邯郸路220号